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如何才能确保复养的高成功率,心里面可能都没有底,再加之过去两个月听到的都是成功的少失败的多,更让一些猪场不知所措。
 
 

 

其实,发生了非瘟的猪场复养真的那么难吗?这其中哪些环节成为制约我们的因素?借鉴国外的一些资料以及国内一些成功复养场的经验,我认为在实际洗消过程中的科学而经济的检测手段必不可少。
 
一、非瘟病毒在环境中的生存能力与猪场改造方案的实施

 

表1:《非洲猪瘟的科学观点》

表2:不同环境中的存活能力

 

注:

 

1、“室温”指环境温度15-25℃,最宽范围为15-30℃,

  

2、“粪污”是指相对静态的粪污或者粪便即没有被主动添加或者减少且无人为搅动。

 

表3:热耐受能力(多方数据来源)

环境温度(℃)

<4

25-37

50

56

 60

 65

85

耐受时间(分钟)

>1年

数周

180

70

 30

 20

3

 

由上面的表1可以知道以下几个重要参数,非瘟病毒在粪便中仅能存活11天,在被污染的猪圈中至多能存活一个月,但在腐烂的血液中可以存活15周左右的时间,因此在整个洗消过程中清除ASF期间的血迹十分重要,地板缝隙、金属栏杆、墙面、饲槽只要做到先浸泡再打上泡沫然后使用高压热水(85度左右)强力冲洗,去除环境中的血迹应该不在话下,之后再以2~3%的火碱完全可以杀灭非瘟病毒;个别猪场金属栏杆上如果污垢较多,可以用钢丝刷进行强力清洗或者重新上层油漆。

    

猪场真正难和工程量大的是猪舍周边的污染的土壤、木质垫板上的血迹,笔者建议猪舍之间的道路全面使用C30混凝土进行硬化,猪舍与猪舍间的空地上离开猪舍屋檐1.5m,先铲去表层3-5cm土壤然后覆盖上生石灰(晴天注意适当浇水)的方法,包括死猪深埋处及氧化塘周边一样要清除表层部分土壤,再覆盖上生石灰,确保安全。这些铲走的土壤必须加生石灰找地方进行深埋处理。

 

  

而对于所有可能被污染的木质材料、饲料袋、外包装盒等能燃烧的东西则全部焚烧,猪舍内部不用木质材料,全部换上钢丝绳绑定电器开关、插座。妊娠限位栏如果通贯饲槽曾经受到污染,建议敲碎重新新砌瓷砖通贯水槽或干脆换上单个橡胶饲槽。

    

猪场的复养是一个系统工程,猪场应该抓住全面清群之后5-8个月空闲时间作适当的改造,新建种猪隔离舍、新建隔离过渡生活区(人员至少生活两天),重新规划全场人员行进路线,做到净道、污道严格分离、最好如上图所示,设有专门的进猪通道、专门的出猪通道、专门的死猪处理通道,并在全场地形图上标示出来,再也不能象非瘟发生前猪场净道污道混合共用一条道路,猪场内就可能形成交叉感染。每个岗位、每个人的行进路线都要事先规划,严格遵循由净区向污区单向流动原则,人员之间尽量避免交叉污染的可能。新增一些必要的设施和设备,如中转对接平台、高压热水清洗机、PCR检测设备及试剂、员工衣柜、鞋柜、洗手池、洗澡间等,最重要的其实是员工的满意度,要让员工感觉入场洗澡就象是在外面浴池洗澡一样舒心,有好的洗头膏,有专门的沐浴露,同时注意防滑设计,员工就不会逃避沐浴,甚至会远远超过十分钟规定时间,有条件的猪场可以在淋浴处设置专门的卫生间,换洗下来的衣服有专门的洗烘干设备,擦干身上的水珠也有专门的大浴巾。我认为一个猪场的生物安全水平高低看看他的洗澡间设置及员工满意度基本可知。

二、复养洗消过程中,如何灵活应用各种检测手段?

  

目前非瘟检测常用的是qPCR方法,qPCR检测最大的缺陷就是检测样本量大时容易造成实验室内的污染,且采样后要送相关实验室等待结果,因此一个实验室每天的检测样数量有着严格的规定,且qPCR检测一个样品的成本基本在65元以上,1000个样那就是65000元,某种程度上成本也过高。那现场检测究竟有没有更为经济有效的方法呢?

  

其实是有的。在发生非瘟复养猪场可以在第一遍粗洗、第二遍细洗中科学运用手持ATP检测仪进行检测,因为是手持检测仪器在现场操作更加方便,能即时知道哪里洗消存在着死角或漏洞,从逻辑上讲,如果猪场洗消后都有蛋白和细菌存在的话,就不要谈ASF病毒能否清除干净了;只有在第三遍精洗及消毒后才需要使用qPCR全面检测,这样能有效的节省洗消后检测费用,同时也达到洗消检测的目的。下面我来详细介绍一下ATP荧光检测法。

  

ATP(Adenosine Triphosphate),中文名为腺嘌呤核苷三磷酸,又叫三磷酸腺苷。它普遍存在于细菌等微生物细胞内,ATP是微生物新陈代谢的能量物质。ATP生物发光法是利用ATP试剂中若干组分如荧光素‐荧光素酶等与被测样本反应产生光子,再利用专门研制的荧光检测仪来捕捉和检测发光值,由于被测样本所含细菌等微生物的数量与所含的ATP 值、以及ATP 值与发光值之间存在一定的函数关系,因此通过检测发光值即能得到被测标本所含细菌等微生物含量。

  

国外 ATP 检测技术从上世纪 90 年开始研究,发展至今有了长足的进步和发展。ATP检测技术实验结果准确可靠,值得信赖。美国多个专业权威机构研究了 1000 个以上的样品,这种只需十几秒就能完成检测的快速检测法所得到的实验结果90%以上与 24‐48小时标准细菌培养法/平皿法所得结果一致。测试饮用水时,比标准法灵敏度大100 倍以上,而样品量只要传统方法的1/100。测定结果与传统细菌培养法所得结果相比,相关性高达 92‐98%。加拿大食品监查协会经过比对实验后发现,本产品测定结果与标准培养法的相关性是98%。美国 FDA推荐使用 ATP检测系统和试剂盒用于牛奶细菌数的快速检测。

  

中国CDC研究证实,ATP检测结果与不同浓度的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和血液成直线相关。通过 ATP方法对细菌检测和表面洁净度检测的应用和技术评估,ATP荧光检测仪已成为中国卫生监督和中国食品药品监督官方部门指定的卫生监督和食品安全相关的专用检测设备,被国家指定用于食品加工、储存运输、贸易、餐饮服务以及医疗系统物体表面及操作人员手等表面洁净度快速测定,并且以发放政府文件的方式要求购买和配备 ATP荧光检测仪和配套试剂,作为卫生监督和食品安全现场快速检测能力建设的重要举措。

  

2010年, BioLum‐Ⅱ型手持式 ATP 荧光检测仪和现场快速检测 ATP 试剂一体化拭子进入批量生产,性能满足食品药品监督部门、卫生监督部门、食品加工行业、餐饮服务行业、航空配餐、大型企业食堂、学校食堂、大型活动保障部门等食品安全涉及领域细菌和环境物体表面检测、手卫生检测、餐饮具表面洁净度检测;化妆品制造业污染控制、医院感染控制、空气细菌污染检测、环境监管部门等污染监管领域细菌检测和表面洁净度检测。

  

ATP荧光检测法能在十几秒内实现检测,它大大提升了传统细菌培养法 24‐48 小时的工作效率,ATP方法的实现包括仪器、试剂和如何使用三大要素。

  

仪器 为了满足现场快速检测的需求,ATP荧光检测仪宜选择手持式从而实现流动状态即时检测,当仪器和试剂配合使用,整体灵敏度达到 10‐15‐10‐18 摩尔ATP 范围时,可以用于食品表明微生物检测、手卫生检测、餐饮器具洁净度检测。

  

试剂 专用的 ATP试剂盒,必须是可去除游离 ATP和体细胞 ATP,只针对细菌细胞ATP 检测,所谓去除干扰物,这是基本要求。其次荧光素酶、虫萤光素、裂解液、取样拭子等组分最好设计成一体化,整体便于现场携带方便检测使用。

  

如何使用 取样是影响准确性和一致性的关键之一,可按照医院消毒卫生标准等规范要求,参照手持式ATP仪说明书采样、检测、计算得出结果并记录报告。运输车辆及环境清洗参考值设定为50RUL。

下面介绍一下ATP荧光仪使用方法。

 

ATP荧光检测的优势所在

  

灵敏度高 —— 10-15~10-18 mol/L;

  

速度快 ——常规培养法至少18-24h以上,而ATP只需要几分钟;

  

可行性——微生物数量与微生物体内所含ATP有着明确的相关性。通过检测ATP含量,可间接得出反应中微生物数量;

  

可操作性——传统细菌培养方法需在实验室由经过培训的技术人员进行操作;而ATP快速洁净度检测操作非常简便,只需简单的培训即可由一般工作人员进行现场操作;

  

性价比更高 —— ATP生物荧光检测与实验室荧光PCR比,费用大大降低。

 

总之,科学而实用的ATP荧光检测能节省时间和检测的工作量,同时也能节省检测费用,希望想复养的猪场能把这个在国内卫生系统行之有效、公认科学的检测方法能灵活应用于猪场复养洗消过程中,从而减少qPCR的采样数,减轻实验室的工作量,做到更准确地检测环境中ASF病毒存在的可能性。

[责任编辑:猪小妹 ]
标签

非洲猪瘟,复养

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